В игре Marvel Comics Spider-Man: The Sinister Six показан супергерой Человек-паук, пытающийся победить шестерых своих заклятых врагов, Зловещую шестерку: Доктора Осьминога, Хобгоблина, Шокера, Хамелеона, Мистерио и Стервятника. Игрок будет управлять как Человеком-пауком, так и его альтер-эго Питером Паркером.
В своей основе это приключенческая игра. Она состоит из общения с людьми и решения головоломок. Время от времени игрок должен выбирать, какое предложенное событие он будет исполнять, так или иначе ведя повествование. Возможны шесть различных сюжетных линий и концовок. Головоломки бывают типа "взломай код" или "расшифруй сообщение".
Каждый раз, когда встречается член Зловещей шестерки, необходимо выиграть мини-игру "Битва с боссом". Можно практиковать эти боевые этапы, не играя в основную игру.